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基于转谷氨酰胺酶交联明胶水凝胶的心肌细胞体外培养

作者: 郭坤铭,叶静,贺子亮,邹佐凤,杨刚 
单位:1 四川大学生物医学工程学院(成都610065)2 四川大学华西医院生物治疗国家重点实验室(成都610041)
关键词: 明胶;转谷氨酰胺酶;心肌细胞;水凝胶;细胞培养 
分类号:
出版年·卷·期(页码):2024·43·2(137-144)
摘要:

目的 研究微生物转谷氨酰胺酶(microbial transglutaminase,mTG)交联明胶水凝胶对新生大鼠心肌细胞活力和增殖的影响,并探究该水凝胶在心肌组织工程应用中的适用性。方法 采用微生物转谷氨酰胺酶交联明胶水凝胶作为基质材料,进行新生大鼠心肌细胞的体外培养。通过倒置光学显微镜观测心肌细胞生长状况,并选取培养一周内的心肌细胞进行细胞相容性评估:采用钙绿黄素-AM/碘化丙啶进行活/死染色,表征了在明胶水凝胶表面培养的心肌细胞的细胞活性;采用MTT法分析细胞在水凝胶表面的增殖情况。使用DAPI和心肌细胞标志蛋白cTnI、cTnT免疫荧光染色法,检测体外培养的心肌细胞在明胶水凝胶基底上的心肌源性和成熟状态。结果 在37℃下加入mTG溶液的明胶快速凝胶,接种后的心肌细胞在4h内完全粘附。明场下可清楚观测到心肌细胞的增殖和随时间逐渐同步的自发搏动行为。活/死染色和MTT测定结果显示,mTGGA水凝胶上心肌细胞具有良好的活性,并保持了相当的增殖潜力。cTnI和cTnT荧光染色结果说明,相较于培养板上传统培养的心肌细胞,mTGGA水凝胶上生长的心肌细胞不仅保持了良好的细胞活力,而且具有相当的心肌细胞表型和更高的特征蛋白表达。结论 mTG交联明胶水凝胶具有高细胞相容性,适合作为心肌细胞体外培养材料,用于工程化心肌组织构建和其他心肌组织工程应用。

参考文献:

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